Зоология

Haliclystus James-Clark, 1863 is the most abundant and problematic genus within the stalked jellyfish (Staurozoa). This genus consists of 13 morphologically poor-distinguished species, one of which is the enigmatic staurozoan Haliclystus monstrosus (Naumov, 1961). This species was originally described by Naumov as Octomanus monstrosus Naumov, 1961. Later, Stepanyants and Sheiko assigned this jellyfish to the genus Haliclystus and drew attention to the morphological similarities of H. monstrosus with previously described Haliclystus salpinx James-Clark, 1963. Both species are characterized by the peculiar organization of the rhopalioids, the attachment organs which are “strongly modified and turned into a grasping “paw”. In the rhopalioid of H. salpinx primary tentacle remnant bears cnidocytes, which are absent in the rhopalioid of H. monstrosus. It is the only distinguishing feature with the highly questionable validity, since during the growth of the staurozoan, the rudiment of the primary tentacle can be reduced. Therefore, is it possible that the species H. salpinx and H. monstrosus should be merged?

Another mystery is the distribution of these species. H. salpinx was first described in the North Atlantic and later, it was discovered in the North Pacific, from the Vancouver Island to the Russian Far East. At the same time, the only known location for H. monstrosus is the Shikotan Island, the Northen Kuriles. Сan these data indicate that H. monstrosus and H. salpinx represent a complex of morphologically similar species?

To begin solving these mysteries, we analyzed samples of both H. monstrosus and H. salpinx deposited in the collection of the Zoological Instutute RAS. We compared the external morphology and some features of the internal organization using histological methods. We also provide photographs of histological sections of H. monstrosus made by Naumov. Additionally, we made measurements of nematocysts isolated from secondary tentacles of both species and found size differences in izorhizas and nematocysts. Nevertheless, the identified differences do not allow to determine two distinct species. We also use the data from the website iNaturalist to supplement known distribution of these staurozoans.

Thus, our work cannot yet answer all the questions raised, but it can become the basis for further clarification of the taxonomy of the puzzling genus Haliclystus.

We thank the ZIN RAS collection, and in particular O.V. Bazhenova, as well as M.A. Kulakova and L. Poliushkevich. The research was performed using equipment of the “Centre for Culture Collection of Microorganisms” of the Research Park of Saint Petersburg State University.

Известно, что при переходе к узкоспециализированным типам пищедобывания глоточное вооружение брюхоногих моллюсков может претерпевать существенные изменения, вплоть до потери радулы. Представители отряда Neogastropoda имеют специальный орган — хобот, позволяющий добраться до труднодоступных пищевых объектов и начать процесс переваривания дистантно. Глоточное вооружение неогастропод, как правило, представлено радулой. Рабочий край радулы располагается на конце хобота. В этой группе может происходить редукция радулы, как в базальном семействе Cancellariidae. Для представителей этого семейства характерна хитиновая челюсть. Если же радула имеется, то она относится к особому нематоглоссному типу. В Белом море обитают представители этого семейства — Admete cf. viridula, для которых отмечено отсутствие радулы, наличие челюсти, но совсем не изучена биология питания.

Цель данной работы — изучение тонкой морфологии хобота адмет и наблюдение за их пищевым поведением, молекулярный анализ взрослых особей и личинок.

Взрослые особи и личинки были выловлены тралом Сигсби и дночерпателем в трех местах Кандалакшского залива. Для изучения тонкой морфологии был использован метод 3D реконструкции по гистологическим срезам, проведена работа на TEM, SEM, конфокальном микроскопе и томографе. На ББС МГУ проведено секвенирование по 5 генам (COI, 16SMoll, H3, 18S, 28S), с дальнейшим построением деревьев в программах MEGA и MrBayes. В условиях холодной комнаты при температуре воды 2 °C проводилось наблюдение за моллюсками в аквариумах.

По итогам прижизненных наблюдений было описано поведение моллюсков и движение их хобота в илистом грунте, на основе чего были сделаны выводы об особенностях их содержания. Молекулярный анализ показал, что в Кандалакшском заливе обитает три или даже четыре криптических вида адмет, не различимых на данный момент по морфологическим признакам. По промежуточным результатам о морфологии стало известно, что их длинный и тонкий хобот содержит много одноклеточных желез, может превышать длину раковины в 1,5–2 раза и сильно сокращаться за счет тонких продольных мышечных волокон стенки хобота и более мощного ретрактора. Буккальная масса смещена к кончику хобота вместе с протоками длинных парных слюнных желез. Челюсть огибает кишку и подстилается эпителием, который плавно переходит в кишечный эпителий. Наблюдение за личинками показало, что чем старше капсула, тем меньше личинок в ней. Возможно, у них развита адельфофагия. По дополненным результатам будут сделаны предположения о типе питания на основе изученной морфологии.

Симбиотические ассоциации с разнообразными микроорганизмами широко распространены среди мшанок (тип Bryozoa). Живущие во внутренних органах зооидов (Lutaud, 1965, 1969,1986; Zimmer and Wollacott, 1981; Karagodina et al., 2018), а также на поверхности их личинок (Woollacott, 1981; Anderson and Haygood, 2007), бактерии могут становиться для мшанок источником защитных веществ (Pettit, 1982; Jeong, 2002). Для некоторых видов мшанок также описана генетическая (Miller et al., 2016) и метаболическая (Mathew et al., 2018) коинтеграция с симбионтом. Тем не менее, проведенные нами исследования свидетельствуют о наличии более широкого спектра симбиотических взаимодействий между микроорганизмами и данным типом колониальных беспозвоночных.

Ультраструктурные исследования ряда беломорских видов показали наличие нескольких вариантов облигатных симбиотических взаимодействий между мшанками и прокариотическими организмами. Наиболее распространенный вариант — формирование фуникулярных тел, многоклеточных органов неясного происхождения, которые встречаются у Aquiloniella scabra, Bugulopsis peachii (Candidae) и Dendrobeania fruticosa (Bugulidae), и выполняют функцию инкубаторов для симбиотических бактерий. Судя по ультраструктуре клеток, образующих фуникулярные тела, у этих видов существуют трофические взаимоотношения с симбионтами, получающими от хозяина дополнительное питание. Сходные органы, обнаруженные в колониях мшанки Stomacrustula cruenta (Fatkullinidae), также содержат скопления симбиотических прокариот. В клетках этих тел, имеются многочисленные крупные гранулы, которые могут быть результатом деятельности бактерий и обеспечивать симбиотрофное питание хозяина.

Кроме фуникулярных тел нами обнаружены однотипные скопления морфологически идентичных прокариот в вестибулюмах зооидов Aquiloniella scabra, Dendrobeania fruticosa и Arctonula arctica (Umbonulidae).

Большой интерес представляют сходные сезонные морфологические изменения фуникулярных тел, которые отмечены в весенне-осенний период у перечисленных выше трех видов кандид и бугулид. В ходе своего развития фуникулярные тела увеличиваются в размерах и затем деградируют, при этом идет соответствующее этому увеличение числа бактерий с последующим их разрушением. Хотя общие тенденции развития и деградации популяций бактерий и содержащих их органов у разных мшанок сходны, каждый вид обладает своими особенностями в реализации данных процессов. У S. cruenta признаков сезонной редукции бактериальных тел пока не обнаружено.

Перечисленное разнообразие вариантов симбиотических взаимоотношений демонстрирует наличие у разных видов мшанок наличие уникальных адаптаций, в виде формирования эволюционно новых для данного типа животных структур, заселения разных стадий жизненного цикла хозяина, а также временнóй и физиологической регуляции размножения симбионтов в хозяине.

Проект выполняется при поддержке гранта РНФ №23-14-00351.

Tardigrada is a group of microscopic segmented animals that are known for their ability to withstand extreme conditions in cryptobiotic state. They inhabit aquatic biotopes from abyssal depths of the ocean to mountain tops. The phylum currently comprises almost 1500 species (Degma et al., 2023). It is divided into two classes: Heterotardigrada and Eutardigrada. While Eutardigrada are characterized by their relatively simplified morphology and worm-like body shape, Heterotardigrada possess long appendages, with cirrus A being the defining character of the class (Kristensen, 1987).

Testechiniscus, first established by Kristensen, 1987, is a genus belonging to the speciose, terrestrial family Echiniscidae. All species comprising this group possess a heavily sclerotised dorsum, bearing rows of segmental and intersegmental plates. Testechiniscus was initially isolated as a spitsbergensis-group within the large genus Echiniscus C.A.S. Schultze, 1840, but then given the generic status on the basis of black crystalline eyes (Echiniscus species possess red lipid eyes) and sclerotised ventral body surface (with eight rows of cuticular plates). However, later molecular evidence caused several species to be excluded from the genus and genetic information is still lacking for a number of other species. Further investigation is needed for reliably establishing the composition of Testechiniscus, as well as for assessing the morphological variability within individual species.

During our investigation of samples from Novaya Zemlya we found a new species of Testechiniscus. Our study involves both classical taxonomic methods, which include morphological and morphometric analyses conducted with the use of light and scanning electron microscopy, and genetic analysis based on four molecular markers (three nuclear: 18S rRNA, 28S rRNA, ITS1, and one mitochondrial: COI). The new species is most similar to T. spitsbergensis in body appendages configuration and the structure of dorsal cuticular plates, but its ventral surface is much closer morphologically to T. laterculus, which possesses several rows of unpaired ventral plates (T. spitsbergensis only bears one).

In addition to the plates on the outer surface of the legs I-III the new species possesses a set of inner leg plates. This character was mentioned once by Kristensen (1987) as a feature of the type species, T. spitsbergensis, but never described in detail. Moreover, the redescription made by Gasiorek et. al in 2018 did not contain this character at all. Our findings allow us to describe these inner leg plates for the first time, thereby introducing a new character in the nomenclature of Echiniscidae body surface sclerotisation.

Центрохелидные солнечники (Haptista, Centroplasthelida) — группа морских и пресноводных амебоидных протистов, для которых характерно наличие особого центра организации микротрубочек и тонких, неветвящихся псевдоподий — аксоподий, несущих экструсомы. Для подавляющего большинства центрохелид характерно наличие внешних скелетных элементов: кремниевых чешуек и/или органических спикул. Структура кремниевых чешуек считается видоспецифичной. Центрохелиды в основном ассоциированы с верхним слоем придонного осадка пресных и минерализованных водоемов.

Acanthocystis — род центрохелидных солнечников из группы Panacanthocystida. Для солнечников этого рода характерно наличие пластинчатых чешуек (plate-scales), расположенных тангентально по отношению к клетке, и радиальных кремниевых чешуек (spine-scales). В настоящее время описано 46 видов этого рода, в основном пресноводных.

Типовым видом рода является Acanthocystis turfacea: сравнительно крупный (50–150 мкм в диаметре) пресноводный солнечник, несущий радиальные чешуйки двух типов с характерной бифуркацией на дистальном конце. Кроме того, в первоописании вида было отмечено наличие симбиотических хлорелл в цитоплазме клетки. Большое количество находок свидетельствует о широком географическом распространении. Однако многие обнаруженные клетки не соответствуют первому описанию. Описаны крупные и мелкие формы без симбиотической водоросли. Помимо пресноводных были обнаружены морские формы. Несмотря на широкий диапазон размеров, широкую соленостную толерантность и возможное отсутствие симбионтов, не было предпринято попыток разделить этот вид на несколько новых или же попытаться исследовать полиморфность A. turfacea, вызванную разными факторами. Идентификация была построена только на морфологических признаках радиальных чешуек.

Нами были найдены представители A. turfacea в пробах из озера Байкал, водоемов Ленинградской области и севера Карелии, а также из Японского и Белого морей. Получены клональные культуры двух пресноводных штаммов и одного морского. Одна из пресноводных культур содержит хлорелл, в то время как вторая симбионтов лишена и отличается более крупными размерами. У единственной клональной культуры морских солнечников симбионты также отсутствуют. Также недавно были изолированы две морские накопительные культуры. Таким образом, были найдены различные формы A. turfacea, отличающиеся по трем параметрам: наличию симбиотических хлорелл, солености среды обитания и размерам. Проведенный анализ показывает, что мы имеем дело как минимум с тремя сильно различающимися разновидностями A. turfacea, предположительно являющимися разными видами, объединенными в один комплекс.

Аннелиды Dinophilus vorticoides при понижении температуры формируют цисты. Процесс инцистирования и его зависимость от температуры у Dinophilus vorticoides были описаны еще в середине ХХ века (Jägersten, 1953). Так, было показано, что инцистирование в жизненном цикле происходит один раз, сопровождается замедлением метаболизма, постепенной деградацией внутренних структур и образованием плотной двухслойной оболочки. Принципы выделения оболочки цисты сходны с формированием оболочки кладки самками Dinophilus vorticoides. Все эти данные представлены в основном в старых работах, зачастую не подкрепленных фотографиями и схемами. Особенности морфологии цист, а также процесс выхода из цист до сих пор не исследованы.

Целью нашей работы является анализ морфологии цист 1–2-недельной давности, а конкретно организации их ресничной, нервной, серотонинергической и FMRFамидергической-системы и сравнение полученных данных с морфологией этих систем у активных взрослых особей.

В лабораторной культуре привезенных с Белого моря Dinophilus vorticoides были получены цисты, сбор цист проводился раз в 1–2 недели. Перед мечением антителами производилась обработка цист ультразвуковым гомогенизатором, чтобы обеспечить проникновение антител через оболочку. Использовались антитела к альфа-тубулину, серотонину, FMRF-пептиду, для мечения границ клеток использовался фаллоидин, ядер — DAPI. Морфология мышечной, нервной и ресничной системы цист проанализирована с помощью конфокальной микроскопии.

У цист 1–2-недельной давности наблюдаются два вида оболочек: после обработки фосфатно-солевым буфером с Triton-X100 часть цист теряли оранжевую окраску, другая часть сохраняла плотную кожистую оранжевую оболочку, которой не было у первых, что соответствует литературным данным. Цисты с более плотной оболочкой намного хуже красятся антителами. При инцистировании наблюдалось уменьшение длины и количества ресничек в клетках ресничных шнуров, эпителиальные железы при этом сохранялись. В строении мышечной и нервной, систем не наблюдалось существенных отличий в сравнении с нормальной морфологией взрослых особей; это говорит о том, что на ранних этапах инцистирования эти системы не деградируют.

Таким образом цисты, образованные за 1–2 недели постепенно выделяют две оболочки, инцистированные особи постепенно утрачивают реснички, однако на данном этапе инцистирования еще не происходит деградации мышечной, серотонинергической и FMRF-амидергической систем, необходимы дальнейшие исследования процесса формирования и морфологии цист у Dinophilus vorticoides.

Колониальные гидроидные полипы Monobrachium parasitum (Mereschkowsky, 1877) являются облигатными симбионтами небольших двустворчатых моллюсков, обитающих в полярных зонах. В связи с обитанием на раковине моллюска внешний вид питающихся полипов претерпел существенные изменения: у них имеется крупный гипостом с большим количеством стрекательных клеток и единственное щупальце. Соответствующие изменения, вероятно, затронули строение нервной и мышечной системы, поэтому целью данной работы стало исследование особенностей организации мускулатуры и RFамидергического компонента нервной системы полипов M. parasitum.

Колонии M. parasitum были собраны в г. Дальнезеленецкой Баренцева моря в августе 2023 года с раковин моллюсков Macoma calcarea. Окрашивание фаллоидином выявило многочисленные короткие продольные мышечные отростки во всем теле полипа, его щупальце и гипостоме. Эти отростки располагались равномерно и не образовывали каких-либо скоплений. По-видимому, продольная мускулатура обеспечивает небольшое сокращение и изгибание тела и щупальца. Поперечные мышечные отростки выявить не удалось. RFамидергические нервные элементы были представлены, во-первых, длинными продольными нейритами в теле, гипостоме и щупальцах. При этом количество выявленных нейритов в гипостоме было больше, чем в теле. Тел нейронов в данном случае выявить не удалось. Эти нервные элементы сопровождают мускулатуру и, вероятно, могут принимать участие в регуляции сокращения полипа. Вторая группа RFамидергических элементов была представлена многочисленными крупными клетками в эпидермисе гипостома, как правило, близко прилегающими к книдоцитам. Эти клетки обладали хорошо выраженным перикарионом и одним или двумя короткими отростками, направленными к центру тела полипа или продольно. Исходя из локализации этих клеток, их соседству с книдоцитами и ранее показанной чувствительной функцией у RFамидергических нейронов книдарий, мы полагаем, что они могут являться сенсорными и обеспечивать механо- и/или хеморецепцию гипостома.

Таким образом, мускулатура питающихся полипов M. parasitum представлена, в основном короткими продольными мышечными отростками. RFамидергические элементы нервной системы в теле выражены слабо, однако образуют множественное скопление сенсорных клеток на гипостоме полипа. Мы полагаем, что это связано с тем, что при утрате большей части щупалец основную чувствительную функцию на себя берет увеличенный гипостом.

Литоральная сердцевидка Cerastoderma edule встречается вдоль побережий Атлантики от Африки до Мурманского побережья Баренцева моря. Экологические и генетические исследования C. edule Мурмана начала века (Genelt-Yanovskiy et al., 2010, 2018; Nazarova et al. 2015) почти не затронули Кольский залив, отчасти из-за того, что в годы исследований этот вид отмечали только во внешних районах залива. Однако сегодня мы находим его и во внутренних районах залива. Недавно, у C. edule был описан трансмиссивный рак (BTN), проявляющийся как диссеминированная неоплазия (DN) (Metzger et al., 2016). Целенаправленных исследований этой новой, малоизученной болезни в субарктических популяциях не проводилось.

Целью исследования явилось описание популяций C. edule Кольского залива и поиск в них BTN. В 2021–2023 годы были обследованы оба берега внутренних районов залива и найдено три популяции, в губах Грязная, Чалмпушка и Ретинская (последняя популяция была известна ранее, но не исследовалась). Эти популяции, вместе с популяциями из губ Пала и Тюва во внешних районах залива, были выбраны для исследования. Во всех губах проведены качественные сборы генетического анализа (полиморфизм фрагмента COI) и для диагностики DN (проточная цитометрия). Также везде, кроме Тювы, оценены обилие моллюсков (методом учетных рамок) и возрастная структура их популяций (возраст моллюсков — по кольцам зимней остановки роста). Полученные данные сравнивались с опубликованными данными по C. edule Мурмана, включая данные по единственной ранее изученной кольской популяции из губы Пала.

По популяционным характеристикам (обилие, возрастная структура) и по изменчивости COI, популяции залива оказались типичными для Мурмана. Средний возраст варьировался от 4,1 года в Грязной до 7,3 лет в Ретинском, а плотность от 30 шт/м² в Пале до единиц на 100 м² в Грязной. По COI наблюдалась высокая изменчивость между выборками в гаплотипическом разнообразии (H). H±SD варьировалось от 0,22±0,121 в Пале до 0,73±0,124 в Тюве. Это может свидетельствовать об относительно высокой генетической изоляции популяций друг от друга. Интригующим образом, в 2008 году в Пале гаплотипическое разнообразие составляло H = 0,75±0,064 (Genelt-Yanovskiy et al., 2018), что может указывать на временную динамику генофонда этой популяции. DN в ограниченном материале (N = 188) не нашли. Мы планируем продолжить мониторинг BTN у мурманских сердцевидок и проверить гипотезу о временной нестабильности их популяций, расширив область исследования до всего побережья.

Исследование выполнено при поддержке РНФ 19-74-20024.

Род Leptomyxa был установлен Гудеем в 1915 году (Goodey, 1915). В современной его интерпретации, он объединяет организмы, способные варьировать форму тела клетки от субцилиндрической, моноподиальной в движении, и до уплощенной и иногда сетчатой во время покоя или питания. Для представителей рода Leptomyxa характерно образование адгезивных уроидных филаментов.

Вид амеб Rhizamoeba neglecta, позже перенесеный в род Leptomyxa — (Smirnov et al., 2017), был описан из пресноводных местообитаний острова Валаам на основе микроскопических (LM, TEM) и молекулярных данных, собранных в период с 1998 по 2007 г. (Smirnov et al., 2009). Однако иллюстративный материал для этого вида нуждается в существенном дополнении. В частности, фотографии флотирующих форм клетки и деталей строения ядра отсутствуют, вместо них приведены схемы. Типового штамма установлено не было.

Спустя 20 лет с момента первого обнаружения, амебы вида L. neglecta были реизолированы из типового местообитания. Сравнение ампликона гена 18S рРНК изолированного мной штамма с последовательностью гена 18S рРНК R. neglecta KT945251 из базы данных GenBank показало полную идентичность последовательностей. В ходе исследования для L. neglecta были получены современные светомикроскопические фотографии высокого разрешения, демонстрирующие ее основные морфологические характеристики. Впервые были получены микрофотографии флотирующих форм, цист и ядрышек разного размера и формы. Было показано, что эти амебы, в норме моноподиальные, способны также принимать вееровидную форму и перемещаться, сохраняя такую морфологию. Один раз был отмечен процесс слияния псевдоподий и формирование анастомоза, однако сетчатую форму клетки этого вида не образовывали. Полученные данные существенно дополнили описание вида L. neglecta; теперь этот вид описан более детально и на современном уровне иллюстрирован высококачественными светомикроскопическими фотографиями.

Работа выполнена с использованием оборудования РЦ СПбГУ «Развитие молекулярных и клеточных технологий». Работа поддержана грантом РНФ 23-74-00050.

Семейство Dermamoebida (Amaoebozoa: Disсosea) — группа голых лобозных амеб, включающая в себя четыре рода: Dermamoeba, Paradermamoeba, Mayorella и Coronamoeba. Представителей семейства в основном можно отнести к языковидному, ланцетовидному и майорельному морфотипам, однако недавно открытый вид Coronamoeba villafranca демонстрирует черты моноподиального морфотипа. Несмотря на сильные морфологические различия, на мультигенных филогенетических деревьях, представители семейства образуют высоко поддержанную монофилетическую ветвь. Полученная при молекулярных исследованиях информация помогла по-новому взглянуть на морфологические особенности группы и выделить некоторые общие черты. Например, одна из возможных апоморфий — усложнение организации гликокаликса.

Представители типового рода Dermamoeba известны с середины 19го века. Анализ фаунистических работ показал почти всесветное распространение амеб этой группы. Представители рода Dermamoebа обнаруживаются в листовом опаде, почве, грунте пресноводных водоемов. Для различных видов показано необычное пищевое поведение, как считается, возникшее в связи с развитием толстого гликокаликса и использованием в качестве пищи крупных неподвижных объектов, таких как конидии грибов, клетки водорослей и цисты других амеб. Подобная диета указывает на важную роль дермамеб в пищевых цепях. Несмотря на широкую географию распространения и важную экологическую роль, на данный момент имеется ощутимый недостаток современных данных об этой группе. Сейчас известно только четыре вида рода Dermamoeba, при этом только для двух имеются молекулярные данные. Другие два вида, в том числе типовой вид D. granifera, последний раз подробно были изучены во второй половине XX-го века. Известные виды можно различить морфологически на основе сравнения размеров клеток и организации ядра.

На первом этапе современного изучения группы нами получены штаммы из географически удаленных точек: Дальние Зеленцы (мох), Ботанический сад СПбГУ (почва), Луга (почва), Кипр (мох и опад) и Сейшельские острова (мох).

Для изолированных штаммов были получены высококачественные световые фотографии и морфометрические данные. По морфологическим признакам большинство изолятов можно отнести к виду D. fibula. Амебы из штаммов 156, 149 и штамм с Сейшельских островов имеют меньший размер и, вероятно, являются новыми для науки видами. Амебы из лужского штамма сильно крупнее остальных и идентифицированы как D. algensis. Для более точной идентификации необходимо получить молекулярные данные.

Работа выполнена при поддержке гранта РНФ 23-74-00050 с использованием оборудования РЦ «Развитие молекулярных и клеточных технологий» и «Культивирование микроорганизмов» Научного парка СПбГУ.

Лимаксные амебы широко распространены в наземных местообитаниях. Это в основном небольшие амебы (менее 70 микрометров в длину) монотактического морфотипа: моноподиальные, субцилиндрические в поперечном сечении, с единым направленным током цитоплазмы и гладкой, без складок поверхностью (Smirnov and Brown, 2004). Многие такие амебы, согласно современной системе, относятся к семейству Hartmannellidae (Amoebozoa: Tubulinea: Euamoebida), хотя подобные морфологические признаки характерны также для некоторых других представителей класса Tubulinea — Leptomyxa, Rhizamoeba (Page 1988, 1974), Discosea: Janickina pigmentifera, Coronamoeba villafranca (Volkova and Kudryavtsev, 2021; Kudryavtsev et al., 2022) — и даже представителей групп за пределами Amoebozoa — Naegleria, Vahlkampfia (Discoba: Heterolobosea: Vahlkampfiidae) (Page 1969, 1988, 1991). Небольшое количество морфологических признаков практически не позволяет различать лимаксных амеб только при помощи методов световой микроскопии. В связи с этим молекулярные методы являются более надежным и удобным инструментом для идентификации и классификации подобных организмов.

В рамках нашей работы по изучению биоразнообразия амеб семейства Hartmannellidae, нами были собраны пробы листового опада из ботанического сада СПбГУ. Для получения обогатительных накопительных культур пробы высевали на питательный агар. В одном из высевов был обнаружен штамм, получивший название БsAm.

Амебы полученного штамма были сравнительно небольшого размера: средняя длина 36 мкм (23–45 мкм, n=30), ширина, в среднем, 8 мкм (6–11 мкм). Отношение длины к ширине составляло 4–6 (в среднем 5). Клетки двигались моноподиально, лишь изредка образуя дополнительную псевдоподию при смене направления движения, имели продолговатую, червеобразную или булавовидную локомоторную форму. Фронтальная гиалиновая зона не всегда была заметна в движущейся клетке, но, если присутствовала, то была достаточно широкой. Задний конец клетки имел уроидные структуры ворсинчато-бульбовидного типа. В цитоплазме можно было наблюдать одно везикулярное ядро диаметром от 2 до 4 мкм (в среднем 3 мкм, n=30), пищеварительные вакуоли, как правило, одну сократительную вакуоль, а также многочисленные сферические включения разной плотности. Никаких кристаллов или других светопреломляющих структур обнаружено не было.

Для более точной идентификации амеб выделенного штамма нами была получена последовательность гена 18S рРНК. Она надежно группировалась в молекулярно-филогенетическом дереве с другими последовательностями представителей рода Ptolemeba, что соответствовало данным световой микроскопии. Однако данные морфометрии клеток выделенного штамма и наличие в последовательности гена 18S рРНК структурных различий, позволяют предположить, что изученные амебы относятся к новому виду рода Ptolemeba.

Исследование выполняется при поддержке гранта РНФ 23-24-00264. При выполнении работы использованы технические возможности ресурсных центров «Культивирование микроорганизмов», «Развитие молекулярных и клеточных технологий», «Вычислительный центр СПбГУ» и «Биобанк» научного парка СПбГУ.

Лобозные амебы рода Thecamoeba широко распространены в природе и могут быть изолированы из различных местообитаний. Текамеб сравнительно легко распознать в накопительных культурах благодаря уникальному набору морфологических признаков: отсутствие псевдоподий и субпсевдоподий во время локомоции, уплощенная форма тела и наличие на поверхности клетки складок или гребней. Совокупность морфологических особенностей позволяет отнести текамеб к стриатному или ругозному морфотипам. Долгое время считалось, что текамебы — одна из немногих групп голых лобозных амеб, представителей которой можно сравнительно просто идентифицировать до вида на светомикроскопическом уровне. Основными определительными признаками для идентификации отдельных видов текамеб служат морфологические особенности и размер локомоторной формы, а также общий паттерн организации ядрышкового материала. Однако, ряд последних исследований показал, что каждый «классический» вид, может скрывать группу морфологически похожих видов. Кроме того, был описан вид T. astrologa, демонстрирующий сильный полиморфизм по одному из основных определительных признаков текамеб — строению ядра. Эти исследования показали необходимость получения молекулярных маркеров для идентификации видов.

В рамках исследования разнообразия лобозных амеб из наземных местообитаний, из листового опада на острове Среднем Керетского архипелага Белого моря была изолирована культура текамеб. Для дальнейшего изучения была получена клональная культура, получившая название Та56. Совокупность морфологических признаков изолята позволяет отнести его к группе близких видов T. similis. Морфологические исследования также показали полиморфизм организации ядрышкового материала Та56 в рамках паттерна, характерного для этой группы видов. Полученная последовательность гена 18S рРНК амеб, оказалась не идентичной ни одной из последовательностей в базе данных GenBank. Прямое сравнение нуклеотидных последовательностей и филогенетический анализ подтвердил, что штамм Та56 относится к группе близких видов T. similis. На филогенетическом дереве последовательность Та56 занимает самое близкое положение к последовательностям гена 18S рРНК клеток из типовой культуры T. similis. Уровень сходства последовательностей довольно высокий (97%), но кроме одиночных замен, имеются различия во вторичной структуре 18S рРНК, которые позволяют считать штамм Та56 новым видом.

Работа выполнена при поддержке гранта РНФ 23-24-00397 с использованием оборудования РЦ «Развитие молекулярных и клеточных технологий» и «Культивирование микроорганизмов» Научного парка СПбГУ.